默克限制性內(nèi)切酶圖譜又稱DNA的物理圖譜，它由一系列位置確定的多種限制性內(nèi)切酶酶切位點組成，以直線或環(huán)狀圖式表示。在DNA序列分析、基因組的功能圖譜繪制、DNA的無性繁殖、基因文庫的構(gòu)建等工作中，建立限制性內(nèi)切酶圖譜都是*的環(huán)節(jié)
默克限制性內(nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。它可分為三類:Ⅰ類和Ⅲ類酶在同一蛋白質(zhì)分子中兼有切割和修飾(甲基化)作用且依賴于ATP的存在。
構(gòu)建DNA限制性內(nèi)切酶圖譜有許多方法。通常結(jié)合使用多種限制性內(nèi)切酶，通過綜合分析多種酶單切及不同組合的多種酶同時切所得到的限制性片段大小來確定各種酶的酶切位點及其相對位置。酶切圖譜的使用價值依賴于它的準確性和準確程度。
對質(zhì)粒DNA酶切反應而言，限制性內(nèi)切酶用量可按標準體系1μgDNA加1單位酶，消化1-2小時。但要*酶解則要增加酶的用量，一般增加2-3倍，甚至更多，反應時間也要適當延長。
所用的酶量取決于DNA的純度、量和型態(tài)。限制性內(nèi)切酶的活力單位定義為在適當?shù)臏囟认?，?小時內(nèi)，1ugDNA在50ul體積中，被*消化所需的限制性內(nèi)切酶的量。一般說來，線性DNA比超螺旋DNA更易消化。
那么，如何保存限制性內(nèi)切酶？不太常用的限制性內(nèi)切酶多保存在-70oC，每周或每天用的酶保存在-20oC。有一些酶需要不同的保存條件。使用限制性內(nèi)切酶時，應將酶保存在冰上。
在線客服
電話咨詢
